تست MTT یک روش رنگسنجی است که برای ارزیابی زندهمانی و تکثیر سلولی در آزمایشگاه استفاده میشود. در این تست، نمک زرد MTT (۳-(۴،۵-دیمتیلتیازول-۲-یل)-۲،۵-دیفنیلتترازولیوم بروماید) به سلولهای زنده اضافه میشود و توسط آنزیمهای میتوکندریایی مانند سوکسینات دهیدروژناز به فرمازان بنفش تبدیل میشود. این واکنش تنها در سلولهای زنده و فعال متابولیکی رخ میدهد، بنابراین میزان رنگ تشکیلشده نشاندهنده تعداد سلولهای زنده است. تست MTT برای بررسی سمیت داروها، مواد شیمیایی یا شرایط محیطی بر روی سلولها، همچنین ارزیابی اثربخشی داروهای ضدسرطانی و بررسی رشد سلولی در تحقیقات بیومدیکال کاربرد گسترده دارد.
برای انجام تست MTT، باید نوع سلول مورد نظر را مشخص کنید، زیرا حساسیت سلولهای مختلف به مواد و شرایط متفاوت است. همچنین باید تعداد اولیه سلولها در هر چاهک (معمولاً بین ۵۰۰۰ تا ۲۰۰۰۰ سلول) و حجم محیط کشت در هر چاهک را تعیین کنید. اگر هدف بررسی اثر یک ماده خاص است، باید غلظتها و زمانهای تماس ماده با سلولها را مشخص کنید. علاوه بر این، باید محیط کشت مناسب برای سلولها (مثل DMEM یا RPMI) و هر گونه مکملهای لازم (مانند سرم جنینی گاو) را ارائه دهید. در صورت نیاز به مقایسه با کنترل، باید شرایط کنترل را نیز تعریف کنید.
نتایج تست MTT به صورت گزارش کامل شامل میزان جذب نوری (Optical Density یا OD) در طول موج ۵۷۰ نانومتر برای هر نمونه ارائه میشود. این مقادیر نشاندهنده میزان زندهمانی سلولی در هر چاهک است. گزارش حاوی منحنیهای دوز-پاسخ در صورت بررسی اثر غلظتهای مختلف یک ماده خواهد بود. علاوه بر این، درصد زندهمانی سلولی نسبت به کنترل منفی (سلولهای بدون درمان) و کنترل مثبت (در صورت وجود) محاسبه و ارائه میشود. در صورت درخواست، تحلیل آماری نتایج نیز انجام میشود و نمودارهای مربوطه در گزارش گنجانده میشوند. این نتایج به شما کمک میکند تا اثر مواد یا شرایط مختلف بر روی زندهمانی سلولی را به دقت ارزیابی کنید.
