سنتز cDNA فرآیندی است که در آن از مولکولهای RNA به عنوان قالب برای تولید DNA مکمل (cDNA) استفاده میشود. این فرآیند توسط آنزیم معکوس ترانسکریپتاز (Reverse Transcriptase) انجام میشود که RNA را به DNA تکرشتهای تبدیل میکند. سپس، آنزیم DNA پلیمراز از این رشته به عنوان قالب برای سنتز رشته مکمل استفاده میکند تا یک مولکول DNA دو رشتهای کامل ایجاد شود. سنتز cDNA برای مطالعات بیان ژن، توالییابی ترانسکریپتوم، کلونینگ ژنها و تولید کتابخانههای cDNA کاربرد گستردهای دارد. این روش امکان بررسی ژنهای فعال در سلولها، بافتها یا نمونههای بیولوژیکی را در سطح RNA فراهم میکند.
برای انجام سنتز cDNA، باید نمونه RNA با کیفیت بالا را ارائه دهید، زیرا کیفیت RNA به طور مستقیم بر موفقیت سنتز cDNA تأثیر میگذارد. باید مقدار RNA را مشخص کنید (معمولاً بین ۱۰۰ نانوگرم تا ۵ میکروگرم برای هر واکنش). اگر هدف سنتز cDNA برای ژنهای خاص است، باید توالیهای پرایمرهای مورد نظر (مثل اولیگو(dT) برای RNAهای پلیآدنیلهشده یا پرایمرهای ژن-خاص) را تعیین کنید. علاوه بر این، اگر نمونه RNA از بافت یا سلولهای خاصی است، باید شرایط نگهداری و انتقال آن (مثلاً استفاده از یخ خشک) را مشخص کنید. همچنین، اگر هدف استفاده از cDNA در کاربردهای خاصی مانند PCR کیفی یا کمی است، باید این موضوع را اعلام کنید.
نتایج سنتز cDNA به صورت گزارش کامل شامل مقدار cDNA سنتز شده و ارزیابی کیفیت آن ارائه میشود. کیفیت cDNA با استفاده از روشهایی مانند الکتروفورز ژل آگارز و اسپکتروفتومتری ارزیابی میشود. گزارش حاوی اطلاعاتی درباره طول و توزیع اندازه cDNA سنتز شده و عدم وجود آلودگیهای احتمالی مانند DNA ژنومی یا RNA باقیمانده خواهد بود. در صورت درخواست، cDNA سنتز شده در لولههای استریل و با حجم و غلظت مشخص تحویل داده میشود. علاوه بر این، اگر cDNA برای کاربردهای خاصی مانند توالییابی، کلونینگ یا آنالیز بیان ژن آماده شود، نتایج مربوط به آمادهسازی و کنترلهای کیفی نیز در گزارش گنجانده میشوند.
